Kuinka määrittää optimaalinen pitoisuus?
Mitä korkeampi pitoisuus on IPTG:n (isopropyyli-beeta-d-tiogalaktosidi), sitä parempi.Optimaalinen pitoisuus riippuu erityisistä koeolosuhteista ja halutusta induktiovaikutuksesta.
Yleensä IPTG:n pitoisuutta käytetään alueella 0,1-1 mM.Pienemmät pitoisuudet voivat vähentää haitallisia vaikutuksia solujen kasvuun ja voivat vähentää kohdeproteiinien yli-ilmentymisestä johtuvaa sytotoksisuutta.Suuremmat pitoisuudet voivat aiheuttaa liiallista soluaineenvaihduntaa, mikä vaikuttaa solujen kasvuun ja ilmentymistehokkuuteen.
Tapa määrittää optimaalinen pitoisuus voi olla arvioida kohdeproteiinin ilmentymistaso suorittamalla IPTG-induktiotestejä eri pitoisuuksilla.Pienen mittakaavan viljelytestit voidaan suorittaa käyttämällä erilaisia IPTG-pitoisuuksia (esim. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM jne.) ja ekspressiovaikutusta eri pitoisuuksilla voidaan arvioida havaitsemalla kohdeproteiinin ilmentymistaso (esim. Western). blot- tai fluoresenssidetektio).Kokeellisten tulosten mukaan optimipitoisuudeksi valittiin pitoisuus, jolla oli paras ilmentymisvaikutus.
Lisäksi voit myös viitata asiaankuuluvaan kirjallisuuteen tai muiden laboratorioiden kokemuksiin ymmärtääksesi yleisesti käytetyn IPTG-pitoisuusalueen samanlaisissa koeolosuhteissa ja sitten optimoida ja säätää kokeellisten tarpeiden mukaan.
On tärkeää huomata, että optimaalinen konsentraatio voi vaihdella eri ekspressiojärjestelmistä, kohdeproteiineista ja koeolosuhteista riippuen, joten on parasta optimoida tapauskohtaisesti.
Postitusaika: 28.9.2023