4-nitrofenyyli-beeta-D-galaktopyranosidi CAS:200422-18-0

Vaikutus: ONPG on substraatti, jota käytetään erityisesti β-galaktosidaasientsyymin läsnäolon ja aktiivisuuden havaitsemiseen.Kun β-galaktosidaasientsyymi on läsnä ja aktiivinen, se pilkkoo ONPG:n kahdeksi tuotteeksi: o-nitrofenoliksi ja galaktoosijohdannaiseksi.O-nitrofenolin vapautuminen johtaa keltaiseen värinmuutokseen, joka voidaan mitata spektrofotometrillä.

Sovellus: ONPG:llä on useita sovelluksia molekyylibiologian ja biokemian tutkimuksessa:

β-galaktosidaasiaktiivisuuden määrittäminen: ONPG:tä käytetään yleisesti β-galaktosidaasientsyymin aktiivisuuden mittaamiseen ja kvantifiointiin.O-nitrofenolin muodostumisnopeus, joka on suoraan verrannollinen entsyymiaktiivisuuteen, voidaan mitata spektrofotometrisesti.

Geenien ilmentyminen ja säätely: ONPG:tä käytetään usein geenien ilmentymiseen ja säätelyyn liittyvissä kokeissa.Sitä käytetään usein fuusioproteiinimäärityksissä, kuten yleisesti käytetyssä lacZ-fuusiojärjestelmässä, geenien ilmentymisen tutkimiseksi spesifisten promoottorien ohjauksessa.ONPG:llä mitattu beeta-galaktosidaasiaktiivisuus antaa käsityksen geenien ilmentymisen tasosta.

β-galaktosidaasin aktiivisuuden seulonta: ONPG:tä voidaan käyttää kolorimetrisenä seulontamenetelmänä yhdistelmä-DNA-tekniikassa β-galaktosidaasia koodaavan LacZ-geenin läsnäolon ja toiminnallisuuden tunnistamiseksi.Tämä seulontamenetelmä auttaa tunnistamaan klooneja, jotka sisältävät kiinnostavan geenin.

Entsyymikinetiikan tutkimukset: ONPG on hyödyllinen myös β-galaktosidaasientsyymin kinetiikkaa tutkittaessa.Mittaamalla entsyymi-substraattireaktion nopeus eri substraattipitoisuuksilla on mahdollista määrittää kineettisiä parametreja, kuten Michaelis-Menten-vakiot (Km) ja maksimireaktionopeudet (Vmax).