4-nitrofenyyli-beeta-D-galaktopyranosidi CAS: 200422-18-0

Vaikutus: ONPG on substraatti, jota käytetään erityisesti β-galaktosidaasientsyymin läsnäolon ja aktiivisuuden havaitsemiseen. Kun β-galaktosidaasientsyymi on läsnä ja aktiivinen, se pilkkoo ONPG:n kahdeksi tuotteeksi: o-nitrofenoliksi ja galaktoosijohdannaiseksi. o-nitrofenolin vapautuminen johtaa keltaiseen värimuutokseen, joka voidaan mitata spektrofotometrillä.

Sovellus: ONPG:llä on useita sovelluksia molekyylibiologian ja biokemian tutkimuksessa:

β-galaktosidaasiaktiivisuuden määritys: ONPG:tä käytetään yleisesti β-galaktosidaasientsyymin aktiivisuuden mittaamiseen ja kvantifiointiin. O-nitrofenolin muodostumisnopeus, joka on suoraan verrannollinen entsyymiaktiivisuuteen, voidaan mitata spektrofotometrisesti.

Geenien ilmentyminen ja säätely: ONPG:tä käytetään usein geenien ilmentymiseen ja säätelyyn liittyvissä kokeissa. Sitä käytetään usein fuusioproteiinimäärityksissä, kuten yleisesti käytetyssä lacZ-fuusiojärjestelmässä, geenien ilmentymisen tutkimiseen tiettyjen promoottorien säätelemässä tilassa. ONPG:llä mitattu beeta-galaktosidaasiaktiivisuus antaa tietoa geenien ilmentymisen tasosta.

β-galaktosidaasiaktiivisuuden seulonta: ONPG:tä voidaan käyttää kolorimetrisenä seulontamenetelmänä rekombinantti-DNA-tekniikassa β-galaktosidaasia koodaavan LacZ-geenin läsnäolon ja toimivuuden tunnistamiseksi. Tämä seulontamenetelmä auttaa tunnistamaan klooneja, jotka sisältävät kiinnostuksen kohteena olevan geenin.

Entsyymikinetiikan tutkimukset: ONPG on hyödyllinen myös β-galaktosidaasientsyymin kinetiikan tutkimisessa. Mittaamalla entsyymi-substraattireaktion nopeutta eri substraattipitoisuuksilla on mahdollista määrittää kineettisiä parametreja, kuten Michaelis-Mentenin vakioita (Km) ja maksimaaleja reaktionopeuksia (Vmax).