Ditiotreitoli (DTT) on yleisesti käytetty pelkistävä aine, joka tunnetaan myös uutena vihreänä lisäaineena.Se on pienimolekyylinen orgaaninen yhdiste, jossa on kaksi merkaptaaniryhmää (-SH).Pelkistysominaisuuksiensa ja stabiiliutensa ansiosta DTT:tä käytetään laajalti biokemian ja molekyylibiologian kokeissa.
DTT:n päätehtävänä on vähentää disulfidisidoksia proteiineissa ja muissa biomolekyyleissä.Disulfidisidos on tärkeä osa proteiinin laskostumista ja stabiilisuutta, mutta tietyissä koeolosuhteissa, kuten pelkistettävässä SDS-PAGE-analyysissä, proteiinien rekombinaatiossa ja laskostuksessa, on välttämätöntä pelkistää disulfidisidos kahdeksi tioliryhmäksi proteiinin tilarakenteen purkamiseksi. proteiinia.DTT voi reagoida disulfidisidosten kanssa pelkistäen ne merkaptaaniryhmiksi, mikä avaa proteiinin avaruudellisen rakenteen ja helpottaa analysointia ja käsittelyä.
DTT:tä voidaan käyttää myös entsyymiaktiivisuuden ja stabiilisuuden suojaamiseen.Joissakin entsyymien katalysoimissa reaktioissa hapetin voi vähentää entsyymin aktiivisuutta.DTT voi reagoida hapettimien kanssa pelkistäen ne vaarattomiksi aineiksi, mikä suojaa entsyymin aktiivisuutta ja stabiilisuutta.
Verrattuna perinteisiin pelkistysaineisiin, kuten β-merkaptoetanoli (β-ME), DTT:tä pidetään turvallisempana ja stabiilimpana pelkistimenä.Se ei ole vain stabiili vesiliuoksessa, vaan säilyttää myös pelkistävät ominaisuutensa korkeissa lämpötiloissa ja happo-emäsolosuhteissa.
DTT:n käyttö on suhteellisen yksinkertaista.Yleensä DTT liuotetaan sopivaan puskuriin ja lisätään sitten koejärjestelmään.DTT:n optimaalinen pitoisuus on määritettävä tietyn kokeen mukaisesti, ja sitä käytetään yleensä välillä 0,1-1 mM.Pienemmät pitoisuudet voivat vähentää haitallisia vaikutuksia solujen kasvuun ja voivat vähentää kohdeproteiinien yli-ilmentymisestä johtuvaa sytotoksisuutta.Suuremmat pitoisuudet voivat aiheuttaa liiallista soluaineenvaihduntaa, mikä vaikuttaa solujen kasvuun ja ilmentymistehokkuuteen.
Tapa määrittää optimaalinen pitoisuus voi olla arvioida kohdeproteiinin ilmentymistaso suorittamalla IPTG-induktiotestejä eri pitoisuuksilla.Pienen mittakaavan viljelytestit voidaan suorittaa käyttämällä erilaisia IPTG-pitoisuuksia (esim. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM jne.) ja ekspressiovaikutusta eri pitoisuuksilla voidaan arvioida havaitsemalla kohdeproteiinin ilmentymistaso (esim. Western). blot- tai fluoresenssidetektio).Kokeellisten tulosten mukaan optimipitoisuudeksi valittiin pitoisuus, jolla oli paras ilmentymisvaikutus.
Lisäksi voit myös viitata asiaankuuluvaan kirjallisuuteen tai muiden laboratorioiden kokemuksiin ymmärtääksesi yleisesti käytetyn IPTG-pitoisuusalueen samanlaisissa koeolosuhteissa ja sitten optimoida ja säätää kokeellisten tarpeiden mukaan.
On tärkeää huomata, että optimaalinen konsentraatio voi vaihdella eri ekspressiojärjestelmistä, kohdeproteiineista ja koeolosuhteista riippuen, joten on parasta optimoida tapauskohtaisesti.
Yhteenvetona voidaan todeta, että DTT on yleisesti käytetty pelkistävä aine, jota voidaan käyttää vähentämään disulfidisidoksia proteiineissa ja muissa biomolekyylissä sekä suojaamaan entsyymiaktiivisuutta ja stabiilisuutta.Sitä on käytetty laajalti biokemian ja molekyylibiologian kokeissa.
Postitusaika: 28.9.2023